Fl-artiklu preċedenti, iddiskutejnal-Assorbiment u d-Distribuzzjoni ta' oligonukleotidi (ONs).F'dan l-artikolu, se nkomplu d-diskussjoni billi niffokaw fuq il-Metaboliżmu u l-Eskrezzjoni tal-ONs.
B'differenza mid-drogi ta 'molekula żgħira, il-prodotti ta' oligonukleotidi (ONs) juru differenzi minimi fil-metaboliżmu bejn speċi differenti, b'okkorrenzi rari ta 'metaboliti speċifiċi misjuba biss fil-bnedmin jew fi proporzjonijiet ogħla b'mod sinifikanti fil-bnedmin. L-ONs huma primarjament metabolizzati minn endo- u exonucleases, enzimi li ma juru l-ebda speċi, sess, jew differenzi relatati mal-età- fil-mammiferi. Madankollu, dan ma jnaqqasx l-importanza tal-istudju tal-metaboliżmu tal-prodotti ONs. Il-metaboliti li jibqgħu wara l-qsim ta 'ftit nukleotidi xorta jistgħu jippossjedu attività, u l-iskoperta biss tal-prototip ONs tissottovaluta l-attività tal-molekula. Barra minn hekk, metaboliti iżgħar jistgħu ibridizzaw b'sekwenzi off-mira, għal reazzjonijiet tossiċi mhux intenzjonati. Għalhekk, l-istudju tal-metaboliżmu tal-ONs huwa kruċjali.
1.Stabbiltà tal-Metaboliżmu In Vitro
Il-metaboliżmu in vitro huwa komunement użat matul il-fażi ta 'skoperta tad-droga biex tiġi vvalutata l-istabbiltà tal-molekuli kandidati. Filwaqt li t-tipi ta 'metaboliti madwar l-ispeċi huma ġeneralment simili, ir-rati tal-metaboliżmu jistgħu jvarjaw. Sistema ideali ta' evalwazzjoni in vitro hija kruċjali biex titbassar l-istabbiltà in vivo tal-prodotti. Tipikament, plażma, ċelluli tat-tessut fil-mira, jew omoġenati huma preferuti. Għall-amministrazzjoni lokali, matriċi lokali huma rakkomandati.
2.Identifikazzjoni tal-Metaboliti In Vitro
Kif issemma qabel, l-identifikazzjoni tal-metaboliti in vitro hija kruċjali għal molekuli żgħar, iżda għall-ONs, is-sinifikat ta 'dan l-istudju huwa limitat minħabba x-xebh fil-metaboliżmu bejn l-ispeċi. Xi kumpaniji ma jissottomettux dejta dwar l-identifikazzjoni tal-metaboliti fl-istadju IND, li ma taffettwax il-bidu tal-provi kliniċi. Oħrajn, biex inaqqsu r-riskji tar-reġistrazzjoni, ma jagħmlux testijiet in vitro u jipprovdu biss data tal-metaboliżmu in vivo. Xi kumpaniji jipprovdu evidenza bbażata fuq il-letteratura, li tispjega b'mod raġonevoli li r-riskju li ma jsirx dan l-istudju mhuwiex sinifikanti.
3.In Vivo Metaboliżmu
Meta wieħed iqis il-mogħdijiet tal-metaboliżmu prevedibbli tal-prodotti ONs, il-linji gwida OSWG u ICH jissuġġerixxu li tiġi pprovduta din id-dejta qabel provi kliniċi tal-Fażi III.
Sakemm ma jiġux osservati differenzi bejn is-sessi fl-espożizzjoni ta 'mediċini prototipi f'oħrajnStudji PK/TK, il-metaboliżmu in vivo huwa tipikament eżaminat f'sess wieħed. Il-kampjuni tal-plażma jew tal-awrina jinġabru primarjament għall-metaboliżmu. Il-plażma turi konsistenza aħjar mat-tessuti, filwaqt li l-awrina żżid l-aspett tal-metaboliżmu renali. It-tessuti huma wkoll għażla, meta wieħed iqis l-organi fejn l-ONs huma primarjament mogħtija jew l-organi li jesprimu miri tal-PD jew iż-żamma potenzjalment-fit-tul. Madankollu, l-eżaminazzjoni tal-metaboliti fit-tessuti mhijiex rekwiżit regolatorju u jiddependi kompletament fuq l-iskop tar-riċerka tal-kumpanija. LC-MS huwa komunement użat għall-iskoperta tal-metaboliżmu in vivo, li jista' jakkumpanja studji tossikoloġija.
4.Ittestjar tas-Sigurtà tal-Metabolite
Il-linji gwida tal-FDA dwar il-metaboliti jeħtieġu tħassib jekk l-espożizzjoni tal-metabolit fi stat-stat taqbeż l-10% tal-mediċina prototip. Dan japplika wkoll għall-prodotti ONs.
Għal komponenti, peptidi jew linkers ġodda tal-LNP li ma jintużawx fi kwalunkwe mediċina approvata, is-sigurtà tagħhom trid tiġi evalwata.
5.Eskrezzjoni
OSWG u ICH M3 jirrakkomandaw li jipprovdu data ta' eskrezzjoni qabel provi kliniċi ta' Fażi III. Il-mogħdijiet ta' eskrezzjoni għal ONs simili huma l-istess. Ħafna ONs huma prinċipalment metabolizzati fit-tessuti, b'porzjon żgħir biss eliminat bħala l-mediċina prototip.
L-eskrezzjoni tista' tiġi eżaminata fi studji PK separati jew flimkien ma' studji tossikoloġija.Amministrazzjoni ta'-doża waħdafi speċi waħda hija ġeneralment biżżejjed. L-annimali gerriema huma spiss preferuti. Kemm il-mediċini prototipi kif ukoll il-metaboliti għandhom jiġu ttestjati. Il-livelli ta'-doża waħda f'dożi kliniċi maħsuba huma ġeneralment adegwati, iżda jekk id-distribuzzjoni tat-tessuti tiġi vvalutata, tista' tkun meħtieġa doża ogħla. Tipikament, il-komponenti tal-awrina biss jeħtieġ li jiġu ttestjati. Madankollu, jekk l-awrina ma tkunx ir-rotta primarja ta' eskrezzjoni, għandhom jinġabru kampjuni oħra bħall-bili. Jekk isseħħ tossiċità gastrointestinali jew pulmonari, huwa rrakkomandat ittestjar ta' kampjuni addizzjonali mill-ħmieġ u n-nifs.
Għalkemm ir-radjutikkettjar mhuwiex obbligatorju mill-aġenziji regolatorji, il-biċċa l-kbira tal-ONs kummerċjalizzati jużaw dan il-metodu biex jivvalutaw il-bilanċ tal-materjal. Madankollu, OSWG jemmen li l-metaboliżmu u l-eskrezzjoni tal-ONs diġà għandhom biżżejjed dejta ta 'riċerka, u x-xebh ta' prodotti simili ma jiġġustifikax valur addizzjonali mir-radjutikkettjar. Barra minn hekk, jekk jintuża r-radjutikkettjar, ma jistax isir flimkien ma' studji tossikoloġija. Madankollu, għal każijiet fejn metodi oħra m'għandhomx sensittività, jew għal tipi ġodda ta' prodotti ONs, jew għal tessuti b'ħinijiet ta' żamma fit-tul li jfixklu studji kliniċi bbażati fuq eskrezzjoni radjutikkettata, ir-radjutikkettjar fl-annimali għandu xi sinifikat. Kif issemma qabel, jekk jintuża radjutikkettjar, il-pożizzjoni tat-tikkettar għandha preferibbilment tkun f'reġjuni stabbli għan-nukleażi.
Is-Sekrezzjoni tal-Ħalib tas-sider tiddependi fuq il-livell ta' espożizzjoni u t-tul ta' żmien tal-prodott, il-bijodisponibilità orali, u jekk il-popolazzjoni fil-mira tinkludix nisa li qed ireddgħu. Skont ICH S5(R3), dan l-istudju ġeneralment mhuwiex meħtieġ. Riżultati minn studji dwar it-tnixxija tal-ħalib tas-sider li saru fuq prodotti ONs ikkummerċjalizzati wrew konċentrazzjonijiet baxxi ħafna jew ma setgħux jinstabu.
Barra minn hekk, simili għar-rekwiżiti għall-assorbiment, id-distribuzzjoni u l-metaboliżmu, jekk il-konjugati jew il-formulazzjonijiet fihom komponenti ġodda apparti l-ONs, l-iskoperta tagħhom għandha tiżdied mat-testijiet tal-eskrezzjoni. Fl-aħħarnett, għal prodotti ta 'terapija mRNA, minħabba l-instabilità inerenti tagħhom, studji ta' eskrezzjoni mhumiex meħtieġa.
6.Interazzjonijiet In Vitro tad-Droga
DDI prinċipalment jinvolvi enzimi metaboliċi u trasportaturi. Droga tista 'taġixxi bħala "vittma" jew bħala "awtur" li taffettwa l-PK ta' drogi oħra. Mill-perspettiva tal-vittma, l-ONs jeħtieġ li jkunu sottostrati għal enzimi jew trasportaturi metaboliċi tal-Fażi I jew II. Madankollu, l-ONs primarjament jgħaddu minn metaboliżmu permezz tan-nukleażi u mhumiex relatati mal-enzimi jew trasportaturi metaboliċi CYPs. Barra minn hekk, ONs tipikament ma jaffettwawx l-irbit tal-proteini tal-plażma ta 'molekula żgħira. Għalhekk, il-prodotti ONs normalment ma jeħtiġux studji rilevanti bħala sottostrati għal enzimi jew trasportaturi metaboliċi. Madankollu, għal ONs konjugati jew formulazzjonijiet LNP b'komponenti ġodda, jistgħu jiġu kkunsidrati studji dwar sottostrat tal-enżimi. Għal ONs eliminati primarjament permezz tar-rotot tal-kliewi, tista' tiġi evalwata evalwazzjoni ta' jekk humiex sottostrati għat-trasportaturi tal-kliewi. Għal prodotti ONs GalNAc-konjugati, għandha tingħata attenzjoni għal jekk humiex sottostrati għat-trasportaturi tal-effluss tal-fwied.
Mill-perspettiva tal-awtur, ONs tabilħaqq għandhom il-potenzjal li jorbtu b'mod mhux speċifiku ma 'xi molekuli kbar, għalkemm b'affinità dgħajfa, xorta jistgħu jokkupaw siti attivi ta' enzimi jew trasportaturi, li jaffettwaw il-PK ta 'mediċini oħra. Mhux biss l-istruttura tal-ONs iżda wkoll il-komponenti konjugati jew il-komponenti tal-formulazzjoni joħolqu riskji potenzjali. Jekk prodott jiġi żviluppat bl-użu tat-teknoloġija tal-pjattaforma, id-dejta tal-isfond tad-DDI tista 'tiġi referenzjata. Pereżempju, jekk prodott prekursur juri DDI pożittiv, prodotti sussegwenti ddisinjati bbażati fuq il-pjattaforma jeħtieġu wkoll studji rilevanti. Jekk negattiv, dejta u letteratura oħra tal-prodott jistgħu jiġu pprovduti mingħajr il-ħtieġa għal studji DDI addizzjonali. Barra minn hekk, id-DDI normalment jivvaluta l--materjal tat-test kollu, b'metaboliti mhux inklużi fl-ambitu tal-eżami. Peress li porzjon żgħir biss ta 'ONs jaħarbu liżosomi u jidħlu fiċ-ċitoplasma wara l-assorbiment ċellulari, li jaffettwaw l-enzimi metaboliċi, l-epatoċiti jissimulaw aħjar dan il-proċess kollu, filwaqt li pożittivi foloz huma aktar probabbli b'mikrosomi epatiċi. Meta wieħed iħares lejn it-trasportaturi, ONs ikkummerċjalizzati jistgħu tabilħaqq jinibixxu xi trasportaturi, bħal casimersen li jinibixxi MATE1 u eteplirsen li jinibixxi OCT1 u OATP1B1. Għalhekk, huwa rakkomandabbli li jsiru studji dwar l-inibizzjoni tat-trasportaturi ta 'effluss u influss minn ONs.
Minbarra li jikkawżaw direttament DDI permezz tal-irbit, ONs jistgħu wkoll jaffettwaw l-espressjoni ta’ CYPs jew trasportaturi permezz tal-effetti PD tagħhom. Għalhekk, riċerka bir-reqqa tal-letteratura hija meħtieġa biex jiġi vvalutat l-impatt tal-effetti PD tal-prodott maħsub fuq l-espressjoni ta 'enzimi metaboliċi u trasportaturi. L-FDA hija mħassba wkoll dwar l-ONs li jaffettwaw indirettament l-attività tas-CYPs. Pereżempju, iċ-ċitokini jistgħu jaffettwaw l-espressjoni tas-CYPs, u l-ONs jistgħu jirregolaw il-konċentrazzjonijiet taċ-ċitokini. F'każijiet bħal dawn, metodi standard ta' valutazzjoni in vitro ta' CYPs mhumiex applikabbli, u tista' tiġi kkunsidrata evalwazzjoni bl-użu ta' plażma tal-pazjent wara l-għoti fl-epatoċiti.
Il-linji gwida tal-FDA (2020) u tal-EMA (2012) jissuġġerixxu li jitlestew studji DDI għal mediċini ta 'molekula żgħira qabel provi kliniċi tal-Fażi III, li tapplika wkoll għall-prodotti ONs.
7.Konklużjoni
Drogi oligonukleotidi jappartjenu għal kategorija relattivament ġdida ta 'terapewtiċi, u m'hemm l-ebda linji gwida speċifiċi għal studji ADME għal din il-klassi ta' prodotti. Assoċjazzjonijiet industrijali bħall-OSWG kellhom rwol sinifikanti fil-forniment ta 'rakkomandazzjonijiet dettaljati għall-istudji ADME. Filwaqt li l-biċċa l-kbira tal-prinċipji tad-disinn tal-prova għal mediċini oligonukleotidi huma simili għal molekuli żgħar u bijoloġiċi tradizzjonali, għandhom l-ispeċifiċitajiet tagħhom stess. Pereżempju, ir-riskju ta' differenzi bejn is-sessi fl-assorbiment huwa relattivament baxx, li jippermetti studji PK ta'-speċi waħda. Il-ġbir ta' kampjuni bijoloġiċi għandu jqis il-half-ħajja fit-tessuti. Studji tad-distribuzzjoni tat-tessuti għal mediċini oligonukleotidi huma kruċjali u jeħtieġu tragwardi aktar bikrija minn molekuli żgħar u bijoloġiċi tradizzjonali. Barra minn hekk, minħabba l-konsistenza ta 'enzimi metaboliċi madwar l-ispeċi, is-sinifikat ta' studji dwar il-metaboliżmu tad-droga oligonukleotidi mhuwiex għoli daqs għal molekuli żgħar. Mediċini oligonukleotidi tipikament mhumiex sottostrati għal enzimi epatiċi bħal CYPs, iżda jistgħu tabilħaqq jaffettwaw l-attività ta 'CYPs jew trasportaturi, li jeħtieġu attenzjoni għar-riskji DDI. Madankollu, mhux l-istudji kollha jeħtieġ li jitlestew qabel l-IND; ħafna provi jistgħu jiġu pprovduti waqt provi kliniċi. Il-prodotti oligonukleotidi jinvolvu wkoll riskji introdotti minn komponenti konjugati, komponenti tal-vettura tal-kunsinna, eċċ., Li għandhom jitqiesu bir-reqqa fid-disinn tal-istudju peress li jistgħu jaffettwaw il-parametri ta 'skoperta.
